CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

CCK-8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

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广州鼎国生物技术有限公司
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商品品牌

Genview

商品型号

GK3607-100T

毛重

0

详细信息

Cell Counting Kit-8

Cat #:GK3607-100T/ GK3607-500T

一、试剂盒组成、规格、储存:

成分       100T               500T                       储存

CCK-8 溶液       1ml                   5ml                  4℃或-20℃


 

二、产品简介:

Cell Counting Kit-8 简称 CCK-8,是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速 高灵敏度检测试剂盒。CCK-8 基于 WST-8,与 MTT 类似,在电子耦合试剂存在的 情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan。对于同样的细 胞,颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在 450nm 波 长处测定 OD 值,间接反映活细胞数量。

CCK-8 试剂盒可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 以及生物因子的活性检测等。酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。CCK-8 对 细胞无明显毒性。加入 CCK-8 显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,使检测 时间更加灵活,便于找到最佳测定时间。


 

三、CCK-8 优势:

1、使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;

2、能快速检测;

3、检测灵敏度很高;

4、重复性优于 MTT 法;

5、对细胞毒性小;

6、即用型溶液,无需配置,使用方便。


 


 

四、使用方法(仅供参考): 

实验一:细胞活性检测

1、制备细胞悬液:胰蛋白酶消化成单个细胞,计数。

2、细胞接种:根据不同细胞特性,取合适的细胞数铺于 96 孔板,每孔约 100ul 细胞 悬液。将培养板放在培养箱中预培养。

3、向每孔加入 10μl CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡,会影响 OD 值的读数)。

4、将培养板在培养箱内孵育 1-4h。

5、用酶标仪测定在 450nm 处的吸光值。

  

实验二:细胞增殖分析

1、制备细胞悬液:胰蛋白酶消化成单个细胞,计数。

2、细胞接种:根据不同细胞特性,取合适的细胞数铺于 96 孔板,每孔约 100ul 细胞 悬液。

3、CO2 培养箱中培养:细胞接种后培养 4-8h,如果不需要贴壁,这步可以省去。

4、加入 10ul CCK-8:由于每孔加入 CCK-8 量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而 带来误差,建议在加完试剂后轻轻振板几次以帮助混匀。或者直接配置含 10% CCK-8 的培养基,以换液的形式加入。

5、培养 1-4h::细胞种类不同,形成的 formazan 的量也不一样。如果显色不够,可 以继续培养,以确认最佳条件。一般 OD 值在 1 左右较好,最大不超过 2。

6、在 450nm 测定吸光度。如无 450nm 滤光片,可以使用 420-480nm 的滤光片。可 以使用大于 600nm 的波长,例如 650nm,作为参考波长进行双波长测定。


 

实验三:细胞毒性分析

1、制备细胞悬液:胰蛋白酶消化成单个细胞,计数。

2、细胞接种:根据不同细胞特性,取合适的细胞数铺于 96 孔板,每孔约 100ul 细胞 悬液。

3、CO2 培养箱中培养:细胞接种后培养 4-8h,如果不需要贴壁,这步可以省去。

4、加入不同浓度的毒性物质。

5、37℃培养箱中培养:加入毒性物质的培养时间,要看毒性物质的性质和细胞的敏 感性,一般要根据细胞周期来决定,至少要一代以上的时间。

6、加入 10ul CCK-8:由于每孔加入 CCK-8 量比较少,有可能因试剂沾在孔壁上而 带来误差,建议在加完试剂后轻轻振板几次以帮助混匀。或者直接配置含 10% CCK-8 的培养基,以换液的形式加入。

7、培养 1-4h::细胞种类不同,形成的甲臜的量也不一样。如果显色不够,可以继续 培养,以确认最佳条件。一般 OD 值在 1 左右较好,最大不超过 2。

8、在 450nm 测定吸光度。如无 450nm 滤光片,可以使用 420-480nm 的滤光片。可 以使用大于 600nm 的波长,例如 650nm,作为参考波长进行双波长测定。


 

注:

若暂时不测定 OD 值,可以向每孔中加入 10μl 0.1M 的 HCl 溶液或者 1% SDS 溶 液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24 小时内测定,吸光度不会发生变化。 


 

五、储存条件

4℃避光保存 1 年,-20℃避光保存 2 年。


 

六、注意事项

1、使用标准 96 孔板时,通常细胞增殖实验每孔加入 2,000 个细胞/100ul 培养基,细 胞毒性实验每孔加入 5,000 个细胞/100ul 培养基(具体每孔所用的细胞的数目,需 根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要,进行培养并 给予 0-10ul 特定的药物刺激。

2、酚红和血清对 CCK-8 法的检测不会造成干扰,可以通过减去空白孔中本底的吸光 度而消除。

3、CCK-8 试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的话容易产生 漏加或多加。

4、CCK-8 可以检测大肠杆菌,但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过 程中需要避免细菌污染,以免影响结果

5、当在培养箱内培养时,培养板最外一圈的孔容易干燥挥发,导致体积不准确而增 加误差。一般情况下,最外一圈的孔只加培养基,不作为测定孔用。

6、在培养基中加入 CCK-8,培养一定的时间,测定 450nm 的吸光度即为空白对照。 在做加药实验时,还应考虑药物的吸收,可在加入药物的培养基中加入 CCK-8, 培养一定的时间,测定 450nm 的吸光度作为空白对照。

7、金属对 CCK-8 显色有影响:终浓度为 1mM 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会 5%、

15%、90%的抑制显色反应,使灵敏度降低。如果终浓度是 10mM,将会 100%抑 制显色反应。

8、部分悬浮细胞由于染色比较困难,一般需要增加细胞数量并延长培养时间。


 


推荐机构
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